Prinsip kerja pipet Pasteur terutama didasarkan pada aliran-yang digerakkan oleh gravitasi dan aksi kapiler, dikombinasikan dengan kontrol manual perbedaan tekanan udara untuk memfasilitasi aspirasi dan perpindahan cairan.
Kontrol Hisap Manual: Operator melakukan hisapan pada ujung pipet yang lebar-baik secara oral atau menggunakan bola karet tambahan-untuk menciptakan tekanan negatif di dalam tabung, sehingga menarik cairan ke ujung halus.
Gravitasi-Dispensing Berbasis Gravitasi: Setelah pengisapan dilepaskan, cairan mengalir keluar secara alami di bawah pengaruh gravitasi; penyaluran juga dapat dibantu dengan meremas badan pipet secara perlahan atau memiringkan wadah penerima.
Reproduksibilitas Tetesan: Dengan mengkalibrasi rasio "tetesan per mililiter", pipet memungkinkan transfer kuantitatif perkiraan, sehingga cocok untuk prosedur yang memerlukan pengulangan, bukan presisi absolut.
Jaminan Sterilitas: Sebelum digunakan, sumbat kapas dapat dimasukkan ke ujung lebarnya dan disterilkan untuk mencegah kontaminasi mikroba selama penanganan-suatu praktik yang umum terjadi dalam eksperimen mikrobiologi.